Provided is a method for producing a new three-dimensional tissue fragment which can function as a biological pacemaker. This method for producing a pacemaker tissue fragment includes the formation of a three-dimensional tissue fragment obtained by laminating pacemaker cells derived from pluripotent stem cells. The three-dimensional tissue fragment includes pacemaker cells and an extracellular matrix component, and the formation of the three-dimensional tissue fragment includes: laminating coated cells obtained by coating the surface of pacemaker cells with a membrane containing an extracellular matrix component, and culturing the resultant cells or laminating the cell layer of pacemaker cells alternately with a layer containing the extracellular matrix component, and culturing the resultant cells.Cette invention concerne un procédé de production dun nouveau fragment de tissu tridimensionnel qui peut fonctionner comme un pacemaker biologique, ledit procédé comprenant la formation dun fragment de tissu tridimensionnel obtenu par stratification de cellules de stimulation cardiaque dérivées de cellules souches pluripotentes. Le fragment de tissu tridimensionnel comprend des cellules de stimulation cardiaque et un composant de matrice extracellulaire, et la formation du fragment de tissu tridimensionnel consiste à stratifier des cellules revêtues obtenues par revêtement de la surface de cellules de stimulation cardiaque avec une membrane contenant un composant de matrice extracellulaire, et à cultiver les cellules obtenues ou à former un stratifié en alternant une couche cellulaire constituée par les cellules de stimulation cardiaque et une couche contenant le composant de matrice extracellulaire, et à cultiver les cellules obtenues.バイオロジカルペースメーカーとして機能しうる新たな三次元組織片の製造方法を提供する。 多能性幹細胞に由来するペースメーカー細胞が積層された三次元組織片を形成することを含む、ペースメーカー組織片の製造方法であって、前記三次元組織片は、ペースメーカー細胞と細胞外マトリックス成分とを含み、前記三次元組織片の形成は、ペースメーカー細胞の表面が細胞外マトリックス成分を含む被膜で被覆された被覆細胞を積層して培養すること、又は前記ペースメーカー細胞の細胞層と前記細胞外マトリックス成分を含む