本发明涉及H9N2亚型禽流感病毒NS1基因缺失减毒活疫苗候选株rTX‑NS1‑128构建方法及应用。所述H9N2亚型禽流感病毒NS1基因缺失减毒活疫苗候选株rTX‑NS1‑128,是以A/chicken/Taixing/10/2010TX株为母本,对NS1基因的长度进行缺失,使得NS1蛋白只保留如SEQ ID NO.15所示的128个氨基酸。该疫苗候选株仅能在气管中复制,不发生接触传播,安全性好。该疫苗候选株既可单独使用,成为H9亚型禽流感防控的有效工具,亦可与灭活疫苗联合使用,提供更为确实的免疫保护作用。将在H9亚型禽流感防控中发挥极为重要的作用。