本发明提供了一种荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征(CVM)携带者的检测引物,该引物针对荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征致病基因,通过PCR错配技术设计而成,其具有SEQ ID No.1&2所示核苷酸序列,通过该引物可以扩增出105bp的片段。本发明还设计了一对内标引物,其具有SEQ ID No.3&4所示的核苷酸序列。通过上述引物对牛基因组进行特异扩增,可以检测荷斯坦奶牛CVM携带者。本发明提供了一种成本低廉、操作简单、快速、准确并适合于推广应用的针对荷斯坦奶牛脊柱畸形综合征携带者的检测方法,对健全奶牛育种体系,剔除隐性缺陷基因,保持奶业的健康快速发展,有着重要意义。