本发明公开了高产孢量紫色紫孢菌基因工程菌ΔPlflbC及其构建方法与应用,属生物农药技术领域。本发明基因工程菌ΔPlflbC为敲除紫色紫孢菌的PlflbC基因;基因工程菌的保藏编号为CCTCC M 2019348,PlflbC基因的序列如SEQ ID NO.1所示,PlflbC氨基酸的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用OSCAR方法构建PlflbC基因敲除载体;将供体质粒pA‑sur(氯密磺隆抗性基因)‑OSCAR、受体pPK2‑OSCAR‑GFP、PflbC基因5’端同源重组片段和3’端同源重组片段进行Gateway BP反应得到PlflbC基因敲除载体;将PlflbC基因敲除载体转入农杆菌中得到含PlflbC基因敲除载体的农杆菌;将含PlflbC基因敲除载体的农杆菌转化紫色紫孢菌;筛选flbC转化子,并依次采用验证引物对引物flbC验证5/flbC验证3和随机引物对随机插入验证5/随机插入验证3进行验证,即得高产孢量紫色紫孢菌的基因工程菌ΔPlflbC。
