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一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法
- 专利权人:
- 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
- 发明人:
- 陆健,孙军勇,常开霞,蔡国林,李晓敏,吴殿辉
- 申请号：
- CN201610980083.4
- 公开号：
- CN106544312B
- 申请日:
- 2016.08.11
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2020
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法,属于生物技术领域。本发明根据GeneBank中人胃乙醇脱氢酶δδ‑ADH的基因序列合成目的基因,将其与表达载体pET‑32a(+)连接并转化E.coli BL21(DE3)。E.coli BL21(DE3)经异丙基硫化‑β‑D‑半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在。收集并破碎菌体后离心,取沉淀获得包涵体,用低浓度尿素溶液或其缓冲液溶解包涵体获得有活性的δδ‑ADH粗酶液。经HisTrapTM excel亲和层析柱纯化获得目的蛋白,活性在2.085U/mg以上。本发明提供的工程菌所产生的δδ‑ADH可氧化高浓度的乙醇,其在大肠杆菌中以包涵体形式存在;有活性的δδ‑ADH粗酶液只需经包涵体溶解液溶解即可获得,不需要复性操作,可节约成本、简化操作步骤,提高效率。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
