本发明涉及恩夫韦肽技术领域,具体提供一种恩夫韦肽的合成方法和应用。该合成方法包括:以氨基树脂为载体树脂依次与恩夫韦肽第1~25个氨基酸对应的Fmoc‑氨基酸进行偶联反应、酸解,得到多肽片段SEQ ID NO:2;以羧基树脂为载体树脂依次与恩夫韦肽第26~36个氨基酸对应的Fmoc‑氨基酸进行偶联反应并接入乙酰基,酸解,得到多肽片段SEQ ID NO:3;将SEQ ID NO:3与丙酮叉保护的水杨醛进行缩合、脱除保护基,得到多肽片段SEQ ID NO:4;将SEQ ID NO:2与SEQ ID NO:4进行丝氨酸多肽连接,经酸解,得到恩夫韦肽。本合成方法得到的恩夫韦肽具有纯度高、无消旋的特点。