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一种无抗性标记营养缺陷型鲁式酵母的制备方法
- 专利权人:
- 江西科技师范大学
- 发明人:
- 曾斌,陈飞,胡志宏,马龙,胡建文
- 申请号：
- CN201810034447.9
- 公开号：
- CN108148854A
- 申请日:
- 2018.01.15
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明提供了一种无抗性标记营养缺陷型鲁式酵母的制备方法。该技术方案首先分析了鲁式酵母的URA表达基因，分别针对其CDS序列的上游片段和下游片段设计引物，以鲁式酵母总DNA为模板扩增得到目的片段后，分别与pMD19‑T载体连接，再以重组质粒为模板、使用Pfu酶分别扩增，得到上、下游片段。在此基础上，通过融合PCR手段将上、下游片段连接，从而得到了去除URA基因的CDS区域的敲除载体，基于该同源重组片段，本发明利用pMD19‑T载体构建重组质粒，而后通过PEG‑醋酸锂方法转化野生型菌株，对转化产物先以限制性培养基初筛，再通过PCR方法直接验证，最后用含梯度浓度5’‑FOA的培养基进一步验证。本发明所构建的工程菌具有严格的URA营养缺陷特征，同时遗传稳定性良好。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
