本发明公开了一种抗人程序性死亡因子1(PD‑1)单克隆抗体的制备,其可变区序列及应用。本发明提供了1种抗人PD‑1蛋白单克隆抗体,包括单克隆抗体轻链和重链可变区基因序列。所述的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3的第20位至134位所示,所述的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4的第20位至131位所示。本发明新发现了一种能阻断人PD‑1功能的单克隆抗体189‑H‑1及其编码基因,该单克隆抗体189‑H‑1能够与人PD‑1抗原特异性结合,半数有效浓度EC50为1.0667nM,可以特异性阻断PD‑1/PD‑L抑制信号,因此可以将本发明的单克隆抗体189‑H‑1作为PD‑1通路的阻断剂,从而成为肿瘤免疫治疗、慢性病毒感染性疾病及自身免疫性疾病的治疗一种新药物。