Provided are compositions for long-term maintenance of functional hepatocytes in culture, a method for improved maintenance of functional hepatocytes in vitro, and functional hepatocytes cultures according to the methods. The culture compositions include at least: one activator of adenylate cyclase, one TGFβinhibitor, one Notch inhibitor, one Wnt inhibitor, and/or one BMP inhibitor. The combinations of compounds are added to any hepatocyte cell culture medium in an effective amount to maintain functional hepatocyte function in vitro, long term. The hepatocytes can be used for in vitro drug research and to model liver disease.L'invention concerne des compositions pour la maintenance à long terme d'hépatocytes fonctionnels en culture, un procédé pour une maintenance améliorée d'hépatocytes fonctionnels in vitro, et des cultures d'hépatocytes fonctionnels selon les procédés. Les compositions de culture comprennent au moins un activateur de l'adénylate cyclase, un inhibiteur de tgfβ, un inhibiteur de Notch, un inhibiteur de Wnt et/ou un inhibiteur de BMP. Les combinaisons de composés sont ajoutées à n'importe quel milieu de culture d'hépatocytes en une quantité efficace pour maintenir la fonction hépatocytaire fonctionnelle in vitro, à long terme. Les hépatocytes peuvent être utilisés pour la recherche in vitro de médicaments et pour modéliser une maladie hépathique.
