猪O型口蹄疫抗体评价关键技术

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获奖名称：

科技进步奖

获奖区域：

河南省

获奖等级：

一等奖

主要完成人：

张改平; 杨苏珍; 邓瑞广; 王爱萍; 杨继飞; 李学伍; 邢广旭; 郭军庆; 乔松林; 万博; 徐荣军; 李俊朋; 郑爱武; 张荣森; 张丽

关键词：

关键;  技术;  抗体;  蹄;  关键技术;  猪;  口蹄疫;  评价; 

第一完成单位：

河南省动物免疫学重点实验室

获奖时间：

2015

项目名称：

重大动物疫病快速检测试剂的研发

联系人：

邢广旭

联系电话：

0371-65738179

电子邮件：

xingguangxu@163.com

邮编：

地址：

郑州市花园路116号

合作完成单位：

河南农业大学; 郑州大学

单位电话：

0371-65723728;65729031

传真：

0371-65738179

网址：

推荐单位(专家)：

河南省农业科学院

摘要：

“猪O型口蹄疫抗体评价关键技术”是国家“863”计划项目（编号2007AA100606）资助的研究项目，从2007年1月开始实施，圆满完成了各项计划任务。 该项目通过蛋白表达、多肽合成、单抗制备、ELISA和试纸检测方法的建立等，研制出具有自主知识产权的口蹄疫免疫抗体评价ELISA试剂盒与金标试纸快速检测产品以及口蹄疫病毒感染与免疫抗体鉴别诊断ELISA试剂盒和试纸条，建立了猪O型FMDV抗体判定标准，并制定了相应的试纸条制造及检验规程，建立了完善的猪口蹄疫抗体快速检测技术体系，真正实现基层猪口蹄疫抗体的快速、现场检测及口蹄疫感染与免疫抗体的快速鉴别诊断，为口蹄疫预防和控制提供技术支撑。该技术已获得二类新兽药证书1项、国家发明专利1项、发表论文11篇，其中SCI论文3篇。项目主要技术指标和创新点： （1）首次建立了FMDV抗体评价试纸条：根据口蹄疫病毒主要保护性抗原VP1上的中和表位和主要线性表位，结合主要流行毒株，设计5条多条序列，固相法合成5 条O 型FMDV抗原表位肽，通过SMCC 双功能偶联剂将多肽偶联于BSA 载体蛋白，以胶体金标记BSA-肽作为抗原，SPA 和抗FMDV 中和表位单抗分别作检测线和质控线，成功研制出检测O 型FMDV 抗体的快速检测试纸条。试纸条对O 型FMDV 标准血清的敏感性可达到1：12800。该试纸条与CSF、PCV-2、PRRS、PR、JE以及A 型、Asia1 型FMD阳性血清无交叉反应性，可以用于O 型FMDV 抗体的定性鉴定。免疫试验和田间应用试验结果证实，该试纸条可以用以评价O 型FMDV 疫苗免疫猪抗体产生情况，并与商品化的液相阻断ELISA和UBI ELISA 试剂盒检测结果一致。 （2）首次建立了FMDV感染与免疫鉴别诊断试纸条：根据FMDV非结构蛋白晶体结构，设计合成5条表位多肽。利用FMDV非结构蛋白多肽抗原成功建立了FMDV感染与免疫鉴别诊断试纸方法，敏感性为95.0%，特异性为100%。既可用于大批样品的筛选检测，又可进行小批样品的快速检测，而且结果判定直观、简便，在白色的背景下，根据显色线的出现与否进行判定，重复性好，结果可靠。 （3）猪口蹄疫抗体评价技术体系的建立：建立了“猪O型口蹄疫抗体检测试纸”生产检验标准，制订了“猪O型口蹄疫抗体检测试纸条”的标准操作程序、制造与检验规程、质量标准；制定了猪O型口蹄疫抗体检测试纸抗体水平判定标准，为临床口蹄疫抗体水平评价和免疫程序制定提供指导。 （4）该研究成果已在动物养殖生产中进行了推广应用，有效控制了猪O型口蹄疫疫情，产生了显著的经济效益和社会效益。