单细胞实时荧光成像监测稳态声空化介导细胞内吞递送基因的实验研究

基金项目类型：

国家自然科学基金

基金项目编号：

81401415

来源网站：

国家自然科学基金委员会

来源网址：

http://www.nsfc.gov.cn/

负责人：

金利芳

完成单位：

上海交通大学

中文关键词：

超声; 微泡; 稳态空化; 细胞内吞; 基因递送;

项目类型：

青年科学基金项目

语种：

中文

开始日期：

2015-01-01

结束日期：

2017-12-31

中文摘要：

裸基因不易穿越细胞内膜性结构、易被降解，致递送效率低。细胞内吞可通过囊泡包裹裸基因并定向转运，是安全、高效的基因递送方式。前期研究发现，超声辐照微泡介导基因转染时，可增强网格蛋白介导的内吞活动，使细胞内侧面内吞泡数目明显增多。致“声孔效应”的瞬态空化难以解释这种现象。稳态空化通过推、拉细胞膜增加细胞膜通透性。因此，我们假设稳态声空化刺激细胞内吞，并可介导基因递送。本课题拟通过建立稳态声空化系统，采用ORF（开放阅读框）基因克隆荧光标记内吞特异性蛋白进行单细胞实时荧光成像，实时动态直接观察细胞内空载内吞泡的形成和转归；通过活细胞荧光标记技术，共聚焦显微镜下活细胞内目的基因与内吞通路荧光共定位的方法，确定内吞泡包裹目的基因，监测载基因内吞泡的走向，并通过基因转染效率测定和内吞抑制实验，观察稳态声空化介导基因递送的生物学效应及对细胞内吞的依赖性，为新型基因递送系统的研发奠定实验基础。