人羊膜上皮细胞构建组织工程角膜上皮的研究

基金项目类型：

国家自然科学基金

基金项目编号：

30872808

来源网站：

国家自然科学基金委员会

来源网址：

http://www.nsfc.gov.cn/

负责人：

陈剑

完成单位：

暨南大学

中文关键词：

羊膜上皮细胞; 组织工程; 转分化; 眼表重建;

其他语种关键词：

amniotic epithelial cells; tissue engineering; transdifferentiation; ocular surface reconstruction

项目类型：

面上项目

语种：

中文

开始日期：

2009-01-01

结束日期：

2011-12-31

中文摘要：

本研究进行了人羊膜上皮细胞（hAECs）体外分离、培养、扩增，对hAECs体外培养的生物学特性观察；建立了稳定的hAECs培养方法；培养的hAECs表达角蛋白CK7、CK8和CK18，是单层上皮细胞来源，并表达干细胞转录因子OCT-4；表达干细胞标记分子CD29、CD34，不表达CD44、CD45、CD105。对hAECs进行GFP基因转染，首次证明目的基因人端粒酶逆转录酶基因（hTERT）和标记基因EGFP经慢病毒介导转染入hAECs后，并可在细胞内获得瞬时表达和稳定表达。以共培养方法诱导hAECs向角膜上皮细胞转分化；在纤维蛋白胶载体上进行气-液界面培养，并形成复层上皮，构建组织工程角膜上皮植片。建立了兔眼角膜缘干细胞缺陷模型，进行上皮植片移植动物实验，结果表明体外培养的纤维蛋白胶组织工程人羊膜上皮细胞片在重建角膜上皮的移植术后植片存活情况良好，可形成类似于角膜上皮样复层结构，且CK12呈阳性表达，眼表结构基本稳定。初步建立羊膜上皮细胞诱导转分化为角膜上皮细胞的方法和技术程序，为解决眼表重建材料的短缺、移植排斥反应等难题提供了新思路。