一种暗黑鳃金龟内参基因,所述内参基因为延伸因子1α(EF1α)、核糖体蛋白S5(RPS5)和真核肽链释放因子3(eRF3);其中EF1α的核苷酸序列表如SEQ ID NO:1所示,RPS5的核苷酸序列表如SEQ ID NO:2所示,eRF3的核苷酸序列表如SEQ ID NO:3所示。本发明从多个候选内参基因中筛选出表达最稳定的暗黑鳃金龟内参基因,以及基于内参基因序列设计的实时荧光定量PCR引物,解决了现有暗黑鳃金龟荧光定量PCR实验中没有可靠内参基因的现状。筛选出的内参基因适用于分析功能基因在暗黑鳃金龟不同发育阶段或不同组织部位的表达水平,能够提高检测数据的可靠性、稳定性和重复性。