结缔组织生长因子C区抗原的制备方法

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专利权人:

东南大学

发明人:

刘乃丰,吴国球

申请号：

CN200310112672.3

公开号：

CN1238512C

申请日:

2003.12.18

申请国别(地区):

中国

年份:

2006

代理人:

王之梓

摘要：

结缔组织生长因子抗原的制备方法，对pCOMB3载体双酶切，切除272bp条带后的载体用T4 DNA连接酶自连后转化大肠杆菌，以pET-28(a)⁺作模板扩增，回收550bp条带，将其与切除后的pCOMB₃载体连接，经转化后筛选得阳性质粒；对人内皮细胞原代培养，用牛血清白蛋白对其干预8h，胰蛋白酶消化，用Trizol法提取RNA，合成cDNA，在1.5ml管中加入：ddH₂O 31.5μl，10×Taqbuffr5μl，10mol/L dNTP 1μl，25pmol/μl的引物，0.65μg/μl的cDNA模板10μ1，5U/μl的TaqPlus0.5μl，94℃5min变性，94℃1min，65℃30sec，72℃1min，35个循环，72℃延伸10 min，4℃保温下扩增，对PCR产物与阳性质粒双酶切后，用T4DNA连接酶相连两个片段，转化大肠杆菌JM109，得pKMc1；将pKMc1的大肠杆菌单菌落扩增，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷37℃诱导3 h，得大肠杆菌，超声破碎，层析得结缔组织生长因子抗原。

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/