本发明公开一种抗口蹄疫病毒复制与感染的生物制剂及其制备方法与应用。该生物制剂的活性部分为siRNA-VP1和siRNA-2B;siRNA-VP1的转录模板的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;siRNA-2B的转录模板的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过将siRNA-VP1的转录模板和siRNA-2B的转录模板分别与U6启动子连接,克隆入人复制缺陷型5型腺病毒质粒载体pAdeno-X,得到能分别转录、串联结构的质粒;接着通过包装细胞包装,得到该重组腺病毒Adeno-2B-VP1。通过实验证实,重组腺病毒Adeno-2B-VP1的防治效果优于重组腺病毒Adeno-2B和Adeno-VP1分别单独应用或联合应用的效果。该生物制剂能有抑制口蹄疫病毒复制和抗口蹄疫病感染。