本发明具体涉及一种非洲黄爪蝎抗菌肽基因、抗菌肽Os_116、其结构同源抗菌肽、制备方法及应用。本发明筛选获得一种新的非洲黄爪蝎抗菌肽基因,其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,由该基因编码的非洲黄爪蝎抗菌肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本发明还提供了人工合成的非洲黄爪蝎抗菌肽Os_116及其结构同源抗菌肽,其氨基酸序列如SEQ ID NO:3~5所示,所述抗菌肽Os_116及其结构同源抗菌肽对多重耐药性病原菌和革兰氏细菌具有较强的抗菌活性,其分子量小且具有广谱抗菌机制作用,和传统抗生素相比大大降低了耐药机率,且在低浓度下对人的正常细胞毒性小,是抗生素的最佳替代物。