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一种动物基因工程干扰素α和γ复合制剂及其生产方法
- 专利权人:
- 河南农业大学
- 发明人:
- 王彦彬,崔保安,夏平安,王亚宾,张红英
- 申请号：
- CN200610128462.7
- 公开号：
- CN101209345B
- 申请日:
- 2006.12.26
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 摘要：
- 一种动物基因工程干扰素复合制剂及其生产方法和临床应用。该动物基因工程干扰素复合制剂通过提取动物外周血或脾淋巴细胞，经培养和体外诱导剂诱导，Trizol提取细胞总RNA，设计特异性引物，通过RT-PCR技术克隆干扰素基因，通过T-A策略将其连接到pGEM-T载体；重新设计引物，两端加入不同的酶切序列和起始密码子ATG、终止密码子TAA，并去除前导肽序列，以重组T载体为模板进行PCR扩增，获取动物干扰素基因表达片段；将表达片段进行稀有密码子突变，经双酶切后，胶回收目的片段，连接到经同样双酶切的载体pFastBacTM Dual上；将动物interferon-α克隆到Polyhedrin promoter控制下的多克隆位点，将同一种属动物interferon-γ克隆到p10 promoter控制下的多克隆位点；将构建好的载体pFastBacTM Dual+interferonα+interferonγ转染到DH10BacTM E.coli进行重组；经蓝白斑筛选，PCR鉴定后，将构建好的recombinant bacmid提取纯化，通过脂质体法转染SF9昆虫细胞；表达产物鉴定、纯化；动物基因工程干扰素复合制剂抗病毒活性检测和临床应用效果评价。该动物基因工程干扰素在昆虫细胞共表达的生产方法和临床应用。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
