基于分子结构评价的Bacillus subtilis β-1,4-门内切木聚糖酶胰蛋白酶抗性的理性设计术

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作   者：

虞晓丹;  吴秀秀;  姚冬生;  刘大岭;  谢春芳; 

作者机构：

暨南大学生物医药研究院; 

关键词：

木聚糖酶;  胰蛋白酶抗性;  理性设计;  酶稳定性; 

期刊名称：

中国生物工程杂志

基金项目：

i s s n：

1671-8135

年卷期：

2016 年 36 卷 008 期

页   码：

80-88

摘   要：

饲料用酶在饲喂过程中,不可避免地会受到消化道中蛋白酶的破坏而令其使用效率受到影响,因此,饲料酶的蛋白酶抗性是其十分重要的性质之一.基于酶反应原理与计算化学理论对Bacillus subtilis 168 B-1,4-内切木聚糖酶(XynA)的胰蛋白酶抗性进行理性设计,最终得到三个突变体-xynAR121C 、xynAR121C/K98Q和XynAK391.酶学性质分析显示XynAR121CM和XynAR121C/K98Q与野生型(XynA)的最适反应温度均为60℃,XynAK391为40℃;突变体酶与野生型酶的最适pH都是6.0;人工肠液(pH6.8,10mg/ml胰蛋白酶溶液)处理野生型及其突变体后,XynAR121C/K98Q和XynAR121CM的残留酶活力均明显比野生型高,它们的半衰期分别是野生型的2.02倍和1.52倍,XynAK391在胰蛋白酶溶液中的半衰期为90min,比野生型缩短了37min.