新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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作   者：

华炯钢;  叶伟成;  倪征;  陈柳;  朱寅初;  云涛;  张存; 

作者机构：

浙江省农业科学院畜牧兽医研究所; 

关键词：

σB蛋白;  抗原表位;  新型鸭呼肠孤病毒;  单克隆抗体; 

期刊名称：

中国预防兽医学报

i s s n：

1008-0589

年卷期：

2022 年 44 卷 004 期

页   码：

428-434

摘   要：

σB蛋白是新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的外衣壳蛋白之一,可诱导宿主机体产生群特异性抗体.为制备NDRV σB蛋白的单克隆抗体(MAb),并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达后纯化的重组σB蛋白(rσB)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合,以纯化的rσB为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选出3株杂交瘤细胞,其分泌的MAb分别命名为10-A5、A1-A9和B7-E5.将NDRV ZJ00M株以MOI 0.01感染DF-1细胞72 h后收获细胞,通过western blot鉴定获得的MAb与天然表达的σB蛋白的反应性;分别将NDRV ZJ00M株、鸭经典呼肠孤病毒(CDRV)ZJ2000M株和鸡呼肠孤病毒(ARV)S1133株均以MOI0.01感染DF-1细胞,48 h后经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定MAb的交叉反应性.Western blot结果显示,3株MAb均在41 ku出现特异性条带,表明其均能够与NDRV σB蛋白发生特异性反应;IFA结果显示:3株MAb均与NDRV反应,而不与CDRV和ARV发生交叉反应.上述结果表明,本研究制备的MAb反应原性和特异性均较强.利用人工合成的37条NDRV σB蛋白多肽及其截短的多肽,采用肽扫描法结合间接ELISA方法对3株MAb识别的抗原表位进行鉴定,并通过抗原表位氨基酸序列比对,分析该抗原表位在禽正呼肠孤病毒各成员中的保守性.结果显示,3株MAb识别的最小抗原表位均为33DIEEFHTPDVI43,且该抗原表位氨基酸序列在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株间的保守性均较高.本研究首次制备了 NDRV σB蛋白的MAb,并鉴定了其抗原表位及该表位的保守性,为NDRV检测方法和表位标记疫苗的研究奠定基础.