S100A12在胸膜肺炎放线杆菌诱导猪肺泡巨噬细胞炎性细胞因子表达及吞噬中的作用

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作   者：

刘海瑶;  李娜;  张晓光;  李子亨;  鲍春彤;  姜合祥;  刘柏君;  肖佳孟;  王俊;  李丰阳;  雷连成; 

作者机构：

吉林大学动物医学学院;  西北民族大学生命科学与工程学院; 

关键词：

猪肺泡巨噬细胞（PAM）;  细胞因子;  胸膜肺炎放线杆菌（APP）;  S100A12; 

期刊名称：

中国畜牧兽医

基金项目：

细胞因子风暴在猪胸膜肺炎放线杆菌致病过程中的作用和调控机制

i s s n：

1671-7236

年卷期：

2021 年 011 期

页   码：

4262-4273

摘   要：

试验旨在探究S100A12在胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）诱导猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages, PAM）炎性细胞因子表达及吞噬中的作用。PAM细胞接种APP菌株后,用实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点炎性细胞因子和S100A12的mRNA表达水平;构建S100A12重组蛋白表达载体并进行重组蛋白的表达纯化,用MTT法检测其对PAM的细胞毒性,实时荧光定量PCR检测不同浓度（0、5、50和500 ng/mL） S100A12重组蛋白对PAM炎性细胞因子mRNA表达水平的影响;构建S100A12干扰质粒,用Western blotting、实时荧光定量PCR及流式细胞术检测其干扰效率及其对APP感染PAM后炎性细胞因子mRNA表达水平和细胞凋亡的影响;用平板计数法检测S100A12表达对APP的黏附侵袭及其在PAM细胞内存活的影响。结果表明,APP感染促进PAM中IL-6、IL-8、IL-18、IL-1β和TNF-α等炎性细胞因子表达的同时也促进S100A12的表达,且该表达随APP感染剂量增大及时间的延长均显著或极显著增加（P<0.05;P<0.01）。5、50和500 ng/mL重组蛋白S100A12对PAM均没有毒性。5和50 ng/mL的重组蛋白S100A12均可显著促进PAM中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IL-21和IL-5等炎性细胞因子的表达（P<0.05）,而高浓度的S100A12重组蛋白则对上述炎性细胞因子表达无影响（P>0.05）。干扰质粒可成功阻断S100A12蛋白的表达,与转染shNC的对照组相比,在APP诱导下转染shS100A12干扰质粒的PAM中细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和IL-5的转录水平显著或极显著降低,且细胞凋亡率也显著或极显著增加（P<0.05;P<0.01）。进一步研究发现,干扰PAM中S100A12蛋白的表达可显著增强APP对PAM的黏附侵袭能力及其在PAM内的存活能力（P<0.05）,相反,体外添加S100A12重组蛋白则显著抑制APP对PAM细胞的黏附侵袭及其在PAM内的存活（P<0.05）。以上研究表明,S100A12具有增强APP感染后PAM炎性细胞因子的表达、抑制APP诱导的PAM凋亡和降低APP对PAM的黏附侵袭及其在PAM内存活的作用,为进一步揭示APP感染过程中S100A12对PAM调控作用及机制奠定了基础。