产青霉素G酰化酶工程菌的构建

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作   者：

邵威平;  吴卓颖;  张永玲;  杨富民;  田常庆; 

作者机构：

临夏州人民医院;  甘肃农业大学食品科学与工程学院;  甘肃农业大学生命科学技术学院; 

关键词：

基因工程菌;  PCR;  重组表达;  青霉素G酰化酶; 

期刊名称：

甘肃农业大学学报

基金项目：

i s s n：

1003-4315

年卷期：

2016 年 51 卷 01 期

页   码：

132-137

摘   要：

【目的】构建表达巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶(PGA)的枯草芽孢杆菌工程菌.【方法】首先采用PCR从巨大芽孢杆菌基因组DNA中扩增出长度为2 409bp的PGA编码基因,经琼脂糖凝胶电泳检测及DNA测序验证后,再将其与枯草芽孢杆菌穿梭表达载体PMA5(7.5kb)连接后导入到枯草芽孢杆菌10397中表达,并通过聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶电泳(SDS-PAGE)检验其能否表达.【结果】构建了9.9kb大小的PMA5-PGA重组质粒,经SDS-PAGE验证,青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌10 397中作出表达.基因工程菌在37℃、220r/min培养36h发酵条件下,所产PGA的酶活可达到12.426U/mL,比巨大芽孢杆菌发酵产PGA酶提高了5.26倍.【结论】所构建的枯草芽孢杆菌是青霉素G酰化酶的高产工程菌.