橡胶树棒孢霉落叶病菌酵母单杂交cDNA文库及CcCas5启动子诱饵载体的构建

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作   者：

胡国豪;  杨子平;  刘铜;  张荣意;  侯巨梅; 

作者机构：

中国热带农业科学院南亚热带作物研究所;  海南大学热带农林学院; 

关键词：

启动子;  多主棒孢;  橡胶树;  CcCas5;  酵母单杂交;  cDNA文库; 

期刊名称：

植物保护

i s s n：

0529-1542

年卷期：

2024 年 50 卷 005 期

页   码：

205-212

摘   要：

为了筛选出与CcCas5启动子结合的转录因子，本研究构建了橡胶树棒孢霉落叶病菌的酵母单杂交cDNA表达文库和CcCas5启动子诱饵载体，并对3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole, 3-AT)的最佳抑制浓度进行了筛选。结果显示，构建的酵母单杂交cDNA表达文库总容量为3.49×10～6 cfu,插入片段主要分布于750～2 000 bp之间，重组率为95.8%;克隆了CcCas5基因2 600 bp的启动子序列，预测获得真菌主要的10大类转录因子的结合位点165个；构建了分别携带1 500 bp和1 000 bp启动子序列的酵母单杂交启动子诱饵载体，10 mmol/L的3-AT能抑制pHis2.1-pCcCas5-1000和pHis2.1-pCcCas5-1500的背景表达。试验结果为通过酵母单杂交筛选与CcCas5启动子结合的转录因子和进一步研究转录因子对CcCas5表达的调控作用奠定基础。