基于Cre-LoxP系统的B细胞特异性荧光报告基因小鼠模型的构建及鉴定

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作   者：

吴孟瑶;  张雪婷;  程倩倩;  张纪岩; 

作者机构：

安徽医科大学基础医学院;  军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所; 

关键词：

Cre-LoxP系统;  B细胞;  tdTomato荧光蛋白; 

期刊名称：

中国药理学与毒理学杂志

i s s n：

1000-3002

年卷期：

2023 年 37 卷 005 期

页   码：

361-367

摘   要：

目的 应用Cre-LoxP重组酶系统构建B细胞特异性表达tdTomato蛋白的荧光报告基因小鼠.方法 在Gt(ROSA)26Sor(Rosa26)位点插入1个由CAG启动子驱动的报告基团,其LoxP侧翼设计有STOP盒,可阻止tdTomato荧光蛋白表达,经与CD19-Cre工具小鼠交配繁殖获得tdTomatoCD19-Cre小鼠,Cre重组酶特异性识别LoxP序列,删除STOP盒,从而使B细胞特异性表达tdTomato荧光蛋白.利用PCR进行基因型鉴定.通过流式细胞术和脑膜免疫荧光分别检测野生型对照组小鼠和tdTomatoCD19-Cre荧光报告基因小鼠脾和脑膜B细胞中tdTomato红色荧光蛋白表达.结果 基因型为tdTomatoF/-CD19-Cre+或tdTomatoF/FCD19-Cre+的小鼠为B细胞特异性表达tdTomato天然红色荧光蛋白的荧光报告基因小鼠.而对照组小鼠基因型为tdTomatoF/-CD19-Cre-或tdTomatoF/FCD19-Cre-.流式细胞术测定结果表明,与野生型对照组小鼠相比,tdTomatoCD19-Cre荧光报告基因小鼠脾中表达tdTomato荧光蛋白的B细胞百分比均显著增加(P<0.01);在非B细胞群中仅检测到少量的tdTomato+细胞.且在滤泡型B细胞、边缘区B细胞、T1B细胞、T2B细胞和成熟B细胞等B细胞亚群细胞表面tdTomato荧光蛋白均能稳定表达(P<0.01),百分比分别为(88±8)%,(80±9)%,(86±9)%,(92±6)%和(89±7)%.通过与CD45共定位,在tdTomatoCD19-Cre荧光报告基因小鼠脑膜中也检测到tdTomato红色荧光蛋白表达.结论 成功构建B细胞特异性表达tdTomato荧光蛋白的荧光报告基因小鼠模型,且tdTomato荧光蛋白可在外周免疫器官和中枢神经系统稳定表达.