利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建水稻OsPUX2突变体

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作   者：

高上;  满淼淼;  赵华;  张丽娜;  王加峰; 

作者机构：

广州国家现代农业产业科技创新中心;  华南农业大学国家植物航天育种工程技术研究中心; 

关键词：

U-box;  基因编辑;  CRISPR/Cas9;  水稻;  OsPUX2; 

期刊名称：

安徽农业科学

i s s n：

0517-6611

年卷期：

2023 年 51 卷 009 期

页   码：

73-76

摘   要：

[目的]U-box蛋白是一类决定靶标蛋白特异性的E3泛素连接酶(少部分属于泛素链聚集因子-E4),在植物抗病、抗逆和生长发育各阶段都发挥着重要作用.为揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反应中的具体生物学功能,利用CRISPR/Cas9编辑技术对OsPUX2基因进行编辑.[方法]在OsPUX2第1外显子设计1个20 bp的编辑靶点,构建了OsPUX2基因敲除载体pRGEB32-OsPUX2-gRNA载体,并通过农杆菌介导的转化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈伤组织,经潮霉素检测获得转基因阳性植株,并对T0代转基因植株进行靶点区域序列进行PCR和测序分析,分析ospux2的突变类型.[结果]成功获得了ospux2的敲除突变体材料,对突变类型的分析发现,转基因编辑后代共存在7种突变类型,以缺失突变为主,其中一种纯合突变类型在OsPUX2第一个外显子的第115号碱基处缺失了一个C碱基,导致蛋白的翻译在第84个氨基酸处提前终止.[结论]该研究获得ospux2突变株系对进一步研究该基因的功能具有重要意义.