RNA干扰猪NHEJ通路修复因子对HR效率的影响

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作   者：

全绒;  李国玲;  莫健新;  钟翠丽;  李紫聪;  顾婷;  郑恩琴;  刘德武;  蔡更元;  吴珍芳;  张献伟; 

作者机构：

华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心;  广东温氏食品集团股份有限公司; 

关键词：

RNA干扰;  PNKP;  LIG4;  非同源末端连接;  同源重组;  NHEJ1; 

期刊名称：

遗传

基金项目：

i s s n：

0253-9772

年卷期：

2018 年 09 期

页   码：

749-757

摘   要：

非同源末端连接(nonhomologous end joining,NHEJ)是动物基因组DNA双链断裂(double-strand break,DSB)修复的优选途径,通过与同源重组(homologous recombination,HR)竞争DSB靶点,进而抑制HR的效率。为提高HR效率,本研究针对猪NHEJ通路修复关键因子PNKP、LIG4和NHEJ1的编码序列,设计并合成相应的靶向小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),组成若干对RNAi(RNA interference)系统,将RNAi系统与报告质粒SSA-GFP reporter、HDR-GFP system和ss ODN-GFP system共转染至猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs),检测敲低上述NHEJ关键修复因子后对HR的影响。RNAi结果显示,针对PNKP、LIG4和NHEJ1设计的si RNA均可显著敲低PNKP、LIG4和NHEJ1基因的表达(P<0.05)。选择干扰效果最好的si RNA与报告载体共转染PFFs,结果表明干扰PNKP基因表达后可显著提高单链退火(single strand annealing,SSA)修复效率、双链或单链DNA介导的同源重组定向修复(homology-directed repair,HDR)效率分别为55.7%、37.4%和73.1%(P<0.05),而干扰LIG4和NHEJ1分别提高双链和单链介导的HDR效率为37.5%和76.9%(P<0.05)。