鸭源新型鹅细小病毒的分离鉴定及VP2蛋白的原核表达

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作   者：

魏玲;  熊荣园;  王思怡;  梁洪;  龙冬梅;  杨国淋; 

作者机构：

川北医学院;  南充职业技术学院; 

关键词：

原核表达;  短喙侏儒综合征;  病毒分离;  VP2蛋白;  病毒鉴定;  鸭;  新型鹅细小病毒(NGPV); 

期刊名称：

黑龙江畜牧兽医

i s s n：

1004-7034

年卷期：

2024 年 12 期

页   码：

59-63+68+125

摘   要：

为了获得鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)流行毒株并表达VP2蛋白，试验采集患短喙侏儒综合征的死亡鸭肝脏组织病料样本，首先通过鸭胚传代培养分离病毒，然后对分离毒株进行血凝试验、PCR检测、鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定及致病性试验，最后对VP2蛋白进行诱导表达、可溶性分析、纯化及Western-blot鉴定。结果表明：从临床病料样本中分离到1株病毒，将该毒株接种鸭胚，鸭胚的死亡时间均集中在接种后的第48～72小时之间，死亡鸭胚出现绒毛尿囊膜增厚、胚体有大量出血点、鸭喙短小等短喙侏儒综合征的典型病变特征，将分离毒株命名为SCNC01株。SCNC01株不能凝集1%鸡红细胞，在其基因组DNA中可扩增出NGPV NS1基因序列，该序列与GenBank中的NGPV NS1基因序列相似性在90.6%～98.3%之间，SCNC01株与MK000549、MN415966、JF333590、KC996729、KT598506、MW929338等NGPV毒株处于同一分支，确定该毒株为NGPV。SCNC01株的ELD_(50)为1×10~(-4.5)/0.2 mL,可引起雏鸭出现运动障碍、食欲下降、精神萎靡、喙萎缩、舌头外翻、排白色稀便等临床症状甚至死亡。经IPTG诱导NGPV VP2蛋白获得了表达，且表达形式为包涵体，经His-Tag蛋白纯化柱纯化后，出现与目的蛋白大小一致的单一条带，该蛋白能与NGPV阳性血清特异性结合，具有良好的反应原性。说明试验成功分离到1株鸭源NGPV,并获得了具有良好反应原性的VP2蛋白。