马铃薯Y病毒衣壳蛋白的表达、纯化与结晶条件筛选

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作   者：

蒋君梅;  杜巧丽;  陈美晴;  严云龙;  谢鑫;  李向阳; 

作者机构：

贵州大学;  贵州大学农学院; 

关键词：

表达纯化;  可溶性蛋白;  马铃薯Y病毒;  衣壳蛋白;  结晶; 

期刊名称：

植物保护学报

i s s n：

0577-7518

年卷期：

2022 年 49 卷 002 期

页   码：

508-514

摘   要：

为研究马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)衣壳蛋白(coat protein,CP)在体外表达及CP重组蛋白的晶体生长条件,通过EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ酶切及连接技术构建pET-32a-PVY CP原核表达载体,对PVY CP的诱导剂浓度进行优化,利用蛋白质纯化及脱盐技术对PVY CP进行纯化和脱盐,并分析PVYCP重组蛋白的晶体生长条件.结果表明,成功构建了 pET-32a-PVYCP原核表达载体;PVY CP在大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞BL21(DE3)原核表达系统中,于16℃下利用0.8 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达可获得高浓度的PVYCP可溶性蛋白;PVYCP重组蛋白在二水甲酸镁处理下可生长出棒状结构晶体.