转基因水稻中重组人乳铁蛋白的分离纯化及其抑菌活性研究

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作   者：

吴景欢;  杨丽琛;  刘改革;  宫照龙;  刘继开;  胡豫杰;  郭云昌;  朴建华;  沈志成;  杨晓光; 

作者机构：

浙江大学;  国家食品安全风险评估中心;  中国疾病预防控制中心;  中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素重点实验室; 

关键词：

重组人乳铁蛋白;  分离提纯;  转基因水稻;  抑菌活性; 

期刊名称：

卫生研究

i s s n：

1000-8020

年卷期：

2013 年 003 期

页   码：

399-404

摘   要：

目的研究从转基因水稻中分离纯化重组人乳铁蛋白(recombinant humanlactoferrin,rhLF),并检测其是否具有抑菌活性.方法通过饱和硫酸铵分级沉淀从转基因水稻中分离rhLF后,经CM Sepharose FF交换层析和Sephadex G25分子筛层析进一步纯化rhLF.采用微量肉汤稀释法检测不同浓度rhLF(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和5.00mg/ml)对鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特菌的抑制情况.结果通过分离和纯化成功获得纯度较高的rhLF(纯度约90%),经考马斯亮蓝染色,Western blot和质谱仪鉴定分析确定为rhLF,分子量约为79 kD.抑菌实验显示,5.00和4.00mg/ml rhLF对鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌有持久的抑制效果,2.00和1.00mg/ml rhLF在实验后期也表现出明显的抑菌作用,0.50mg/ml及以下浓度则没有抑菌效果.5.00和4.00mg/ml rhLF在18h内对蜡样芽孢菌表现出一定的抑制效果;5.00mg/ml rhLF对单增李斯特菌在18h内有抑制作用.结论从转基因水稻中可成功分离和纯化rhLF,纯化后蛋白仍具有明显的抑菌活性.