转基因番木瓜基因组DNA的快速制备和PCR检测方法

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作   者：

潘志文;  陈伟庭;  高洁儿;  周峰;  姚涓;  王声斌;  姜大刚; 

作者机构：

农业农村部植物及植物用微生物生态环境安全监督检验测试中心（广州）/华南农业大学生命科学学院; 

关键词：

转基因番木瓜;  检测方法;  DNA制备;  PCR; 

期刊名称：

生物技术通报

i s s n：

1002-5464

年卷期：

2021 年 006 期

页   码：

286-294

摘   要：

转基因番木瓜检测中,模板DNA的制备是关键一步。为了提高检测效率,建立快速制备番木瓜样品基因组DNA和PCR检测方法十分重要。建立了番木瓜基因组DNA的快速制备方法,包括样品准备、制备缓冲液匀浆和稀释上清。在完成不同番木瓜样品的基因组DNA快速制备后,对获得的DNA进行PCR检测验证。普通PCR验证结果显示,本方法制备的叶片和果肉基因组DNA溶液稀释5倍时,PCR扩增条带清晰,更高稀释倍数时,叶片基因组DNA扩增条带强于果肉基因组DNA;实时荧光PCR验证结果显示,叶片基因组DNA的PCR扩增效率位于合理区间。灵敏度测试结果表明,含量低至0.1%的叶片和果肉样品,内标准基因和外源基因特异性片段普通PCR和实时荧光PCR均能得到预期扩增,且重复性较好。本研究建立的番木瓜基因组DNA快速制备与PCR方法效果良好,体系稳定。