载铜绿假单胞菌OprF和PcrV基因联合DNA疫苗的水凝胶缓释系统的构建及免疫效力评价

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作   者：

赵轩;  江晓烽;  秦江雷;  王勇;  石敏;  雍琴;  余娴; 

作者机构：

重庆医科大学附属第二医院Ⅰ期临床试验研究室;  河北省炎症自身免疫性疾病发病机制与控制重点实验室; 

关键词：

联合DNA疫苗;  铜绿假单胞菌;  免疫效力;  水凝胶; 

期刊名称：

解放军医学杂志

i s s n：

0577-7402

年卷期：

2022 年 47 卷 009 期

页   码：

871-878

摘   要：

目的 构建载铜绿假单胞菌(PA)外膜蛋白F(OprF)和V抗原(PcrV)基因联合DNA疫苗的PAEH/PEG DA水凝胶缓释系统,并评价该系统的体内免疫效力.方法 采用简单混合法制备载PA联合DNA疫苗的PAEH/PEG DA水凝胶,测定其凝胶时间,并评价其体外细胞毒性(DC 2.4)、体外降解性能及累积释放率.将9只小鼠随机分为30 min组、2 d组、7 d组,每组3只,通过注射部位凝胶体积变化及皮肤组织病理切片分别评价水凝胶的体内降解性能和安全性;将18只小鼠随机分为6组(n=3):对照组(PBS)、水凝胶组(Gel)、En/pVAX1-OprF组(O)、En/pVAX1-PcrV组(P)、En/(pVAX1-OprF+pVAX1-PcrV)组(OP)、水凝胶+En/(pVAX1-OprF+pVAX1-PcrV)组(GOP),每只小鼠均免疫3次,每次间隔10 d,末次免疫2周后处死小鼠,检测血清特异性IgG抗体、脾淋巴细胞刺激指数(SI)及细胞上清液中γ干扰素(IFN-γ)水平.结果 该水凝胶缓释系统约30 min即可形成凝胶态,体外对DC 2.4细胞无明显毒性,体外36 h时可释放约85%的质粒DNA.该水凝胶体内外降解时间基本一致,7 d内即可完全降解,且具有良好的体内降解性能和安全性;体内免疫实验结果显示,与PBS组比较,Gel组特异性IgG抗体水平、脾淋巴细胞SI及IFN-γ水平无明显变化(P>0.05);与相应的DNA疫苗组(O组或P组)和PBS组比较,OP组和GOP组特异性IgG抗体水平、脾淋巴细胞SI和IFN-γ水平均明显升高(P<0.05,P<0.01);而与OP组比较,GOP组特异性IgG抗体水平、脾淋巴细胞SI和IFN-γ水平均明显升高(P<0.05,P<0.01).结论 载PA OprF和PcrV基因联合DNA疫苗的PAEH/PEG DA水凝胶缓释系统能够缓慢释放联合DNA疫苗,进一步增强联合DNA疫苗的免疫效力,是研发PA疫苗有前景的策略之一.