基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨27nt-miRNA对血管平滑肌细胞自噬的调控作用

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作   者：

李丹;  滕红丽;  覃裕旺;  颜渊鸳;  赵燕姣;  沈凤;  陶晓静;  杨鹏;  罗雪兰;  唐华民;  欧和生; 

作者机构：

广西医科大学药学院; 

关键词：

自噬;  血管平滑肌细胞;  PI3K/Akt/mTOR信号通路; 

期刊名称：

中国临床药理学杂志

基金项目：

高血压相关性内皮型miRNAs的鉴定与功能分析及其对高血压的治疗价值研究

i s s n：

1001-6821

年卷期：

2020 年 02 期

页   码：

137-141

摘   要：

目的探讨27nt-miRNA对西罗莫司诱导的血管平滑肌细胞自噬的调控作用及分子机制。方法将大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为正常组、西罗莫司组、27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组和阴性对照组。正常组给予正常培养;西罗莫司组用100 nmol·L~(-1)西罗莫司作用6 h建立自噬模型;27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组及阴性对照组先转染相应慢病毒载体,待转染成功后用100 nmol·L~(-1)西罗莫司作用6 h建立自噬模型。用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况,用透射电镜观察5组细胞内部自噬小体数量,用四甲基偶氮唑盐法检测5组细胞活性,用Western blot法与qRT-PCR法检测LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的蛋白和mRNA表达水平。结果慢病毒转染细胞成功后27nt-miRNA的表达受到影响;与阴性对照组相比,细胞内自噬小体及自噬溶酶体显著增多,27nt-miRNA组细胞的活性显著增强[(0.90±0.03)vs.(0.72±0.01),P<0.05],LC3-Ⅰ/Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达量均显著增加[(1.92±0.21)vs.(1.59±0.09),(9.47±0.61)vs.(7.19±1.32),均P<0.05],LC3-Ⅱ和Beclin-1的mRNA表达量均显著增加[(1.83±0.33)vs.(1.27±0.19),(1.77±0.29)vs.(1.36±0.23),均P<0.05],PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制;与此同时,anti-27nt-miRNA组细胞质内自噬小体及自噬溶酶体显著减少,且细胞活性显著性降低[(0.60±0.03)vs.(0.72±0.01),P<0.05],LC3-Ⅱ和Beclin-1的mRNA相对表达量均显著下降[(0.90±0.25)vs.(1.27±0.19),(0.98±0.24)vs.(1.36±0.23),均P<0.05]。结论过表达27nt-miRNA可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进血管平滑肌细胞自噬进而引起细胞过度增殖,27nt-miRNA可能成为心血管疾病的潜在治疗靶点。