甘蔗条纹花叶病毒HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg基因酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

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作   者：

翟玉山;  彭磊;  杨永庆;  邓宇晴;  程光远;  郑艳茹;  徐景升; 

作者机构：

农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室福建农林大学; 

关键词：

诱饵载体;  HC-Pro;  VPg;  CP;  甘蔗条纹花叶病毒;  P3N-PIPO;  酵母双杂交; 

期刊名称：

华北农学报

基金项目：

RNAi沉默甘蔗翻译起始因子创制抗花叶病甘蔗新种质
基于阻断甘蔗花叶病病原胞间移动的抗病甘蔗种质创新研究

i s s n：

1000-7091

年卷期：

2016 年 31 卷 01 期

页   码：

83-89

摘   要：

为探索甘蔗条纹花叶病毒与甘蔗的互作机制,利用酵母双杂交技术筛选与SCSMV互作的甘蔗因子基因,利用PCR技术克隆了SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的编码区,构建到酵母双杂交诱饵载体p GBKT7上,获得了p GBKT7-HC-Pro、p GBKT7-P3N-PIPO、p GBKT7-CP和p GBKT7-VPg 4个诱饵载体。结果显示,将重组质粒转化酵母Y2HGold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性;在SD/-Trp/X-α-gal平板上长出白色菌落未变蓝,在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/X-α-gal/Ab A平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对MEL1、ADE2、HIS3和AUR1-C报告基因无自激活作用。构建的诱饵表达载体可以作为诱饵用于文库筛选,为探索SCSMV侵染机制和发病机理奠定了基础。