蔗糖异构酶的GST融合表达和酶学性质

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作   者：

刘羽欣;  高向红;  孙佳明;  王从纲;  李宪臻; 

作者机构：

大连工业大学生物工程学院; 

关键词：

异麦芽酮糖;  GST标签;  蔗糖异构酶; 

期刊名称：

大连工业大学学报

i s s n：

1674-1404

年卷期：

2025 年 44 卷 001 期

页   码：

14-19

摘   要：

为提高重组蔗糖异构酶的可溶性表达量并改善其酶学性质，通过融合GST标签技术对源自Klebsiella sp. LX3的蔗糖异构酶SIase进行表达和改性。以大肠杆菌BL21（DE3）为表达宿主，分别对N/C端融合GST标签的融合酶进行诱导表达获得可溶性蛋白，利用亲和层析技术对重组融合酶进行分离纯化获得纯酶。对融合酶进行酶学性质表征，结果显示，GST-SIase和SIase-GST纯酶的最适反应温度均为40℃,最适反应pH均为6.0。动力学结果显示，GST-SIase对底物蔗糖的Km为（137.6±5.7） mmol/L,kcat/Km为（6.41±0.15） L/（mmol·s）;SIase-GST对底物蔗糖的Km为（159.5±11.8） mmol/L,kcat/Km为（7.06±0.56） L/（mmol·s）。产物特异性分析结果显示，融合酶转化蔗糖的主产物均为异麦芽酮糖，随着转化反应温度的提高，产物中海藻酮糖比例降低，单糖比例提高。利用融合GST标签技术提高了重组SIase的可溶性表达，有利于其在工业上的规模化制备和应用。