幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原的可溶性表达及其多克隆抗体的制备和分析

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作   者：

何萌;  张国林;  李元;  韩学波;  刘宏鹏;  李欣;  钱玲玲;  刘昆梅;  郭乐; 

作者机构：

苏州市药品检验检测研究中心;  宁夏医科大学临床医学院宁夏临床病原微生物重点实验室;  宁夏医科大学颅脑疾病国家重点实验室培育基地; 

关键词：

幽门螺杆菌;  CagL蛋白;  致病岛;  特异性抗体; 

期刊名称：

中国生物工程杂志

基金项目：

miR-20a/miR-17相关ceRNAs网络调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌炎症反应和细胞自噬的作用机制

i s s n：

年卷期：

2020 年 011 期

页   码：

摘   要：

目的:利用原核表达和蛋白质纯化技术获得高纯度的幽门螺杆菌致病岛CagL重组抗原(rCagL),利用其制备anti-CagL多克隆抗体,并分析抗体的特异性.方法:通过生物信息学软件分析rCagL的抗原结构;利用PCR长片段DNA合成技术合成不含有信号肽序列的幽门螺杆菌致病岛CagL基因,将其插入表达质粒p Czn1中,构建重组质粒pCzn1-rCagL.然后,将pCzn1-rCagL转入大肠杆菌Arctic Express中,经IPTG诱导表达后,通过Ni-IDA镍离子亲和层析纯化重组抗原rCagL,利用Western blot鉴定rCagL与His标签抗体和Anti-H.pylori抗体的免疫反应性;最后,通过rCagL辅以弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,制备anti-CagL多克隆抗血清,通过ELISA方法分析抗血清的特异性.结果:生物信息学软件表明重组抗原rCagL具有较好的抗原性质;重组质粒pCzn1-rCagL经双酶切和基因测序等技术鉴定,证实rCagL核苷酸序列与理论序列完全一致;基因工程菌株pCzn1-rCagL/Arctic Express在低温11℃条件经IPTG诱导表达.SDS-PAGE实验结果证实:rCagL可实现相对高效地可溶性蛋白表达,可溶性蛋白约占包涵体的62.07%.经Ni-IDA亲和层析柱纯化,可获得高纯度rCagL,纯度约为96.6%.Western blot结果证实:重组抗原rCagL可特异性与His标签抗体和Anti-H.pylori抗体结合.ELISA结果证实:经rCagL免疫小鼠制备的多克隆抗体anti-CagL可特异性识别rCagL和H.pylori裂解物,具有较高的抗体特异性.结论:重组抗原rCagL在低温条件下可实现可溶性表达,经纯化可获得高纯度抗原蛋白; rCagL具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体具有较好的免疫特异性,为发展H.pylori相关诊断试剂奠定了实验基础.