基于CKB/p53信号通路探讨白花丹醌对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

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作   者：

周凤玲;  袁彬;  叶一娴;  邓舒烨;  马静;  刘红;  马远征;  韦燕飞; 

作者机构：

广西中医药大学第一附属医院;  广西中医药大学基础医学院; 

关键词：

增殖;  白花丹醌;  CKB;  凋亡;  肝癌;  p53信号通路; 

期刊名称：

中国中药杂志

i s s n：

1001-5302

年卷期：

2024 年 009 期

页   码：

2345-2354

摘   要：

基于CKB/p53信号通路研究白花丹醌对人肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。将白花丹醌1～12μmol·L-1处理Huh-7细胞，进行细胞增殖和活性cell counting kit-8（CCK-8）实验，确定1、3、6μmol·L-1为低、中、高浓度用于后续实验。采用规律成簇的间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR）/CRISPR相关蛋白（CRISPR-associated proteins, Cas）-9基因编辑技术敲除Huh-7细胞中的脑型肌酸激酶（creatine kinase, brain type, CKB）基因；CKB过表达慢病毒转染Huh-7细胞上调CKB的表达。通过平板克隆实验检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）检测CKB的mRNA表达情况；蛋白免疫印迹（Western blot, WB）实验检测CKB、p53、双微体同源基因2（mouse double minute 2 homolog, MDM2）、B淋巴瘤细胞瘤2（B-cell lymphoma 2, Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein, Bax）和半胱天冬酶（caspase）-3蛋白表达水平。结果显示白花丹醌显著抑制Huh-7细胞增殖，诱导细胞凋亡。与对照组比较，白花丹醌组凋亡水平显著升高，而白花丹醌联合凋亡抑制剂组凋亡水平显著降低。白花丹醌可显著下调CKB、Bcl-2和MDM2蛋白表达水平，上调p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平。敲除CKB基因后，Huh-7细胞增殖能力降低，凋亡率升高，Bcl-2和MDM2蛋白表达水平降低，p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平升高。上调CKB表达后，Huh-7细胞增殖能力增强，Bcl-2和MDM2蛋白表达水平升高，p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平降低。而白花丹醌可逆转过表达CKB对Huh-7细胞增殖和凋亡的作用。该实验表明，白花丹醌可显著抑制Huh-7细胞的增殖能力，其机制可能是通过抑制CKB表达，激活p53信号通路，调控线粒体相关凋亡蛋白的表达，最终诱导细胞凋亡。