心力衰竭合并肺部感染铜绿假单胞菌OprF蛋白的生物学功能及其原核表达

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作   者：

吴清;  韩泉;  张晋; 

作者机构：

湖北省荣军医院老年医学科; 

关键词：

原核表达;  心力衰竭合并肺部感染;  抗原表位;  铜绿假单胞菌;  外膜蛋白F;  生物学功能; 

期刊名称：

中国老年学杂志

i s s n：

1005-9202

年卷期：

2025 年 45 卷 004 期

页   码：

984-987

摘   要：

目的 分析心力衰竭合并肺部感染铜绿假单胞菌外膜蛋白(Opr)F的生物学功能及其原核表达。方法 由NCBI数据库获取OprF蛋白的基因组信息，分析OprF蛋白理化性质、跨膜结构、信号肽、二级与三级结构等生物学信息。提取心力衰竭合并肺部感染的铜绿假单胞菌基因组DNA,扩增OprF羧基端，构建重组表达载体pET28b-F。采用杂交瘤技术制备单克隆抗体，采用Western印迹法进行鉴定。结果 OprF基因编码蛋白分子量为37.64 kD,脂溶性指数为69.44,等电点为4.98,有多个酶切位点，OprF为亲水性蛋白。信号肽为1～24位氨基酸，OprF蛋白无跨膜结构。二级结构中α-螺旋氨基酸比例为30.45%,β-转角为10.58%,β-片层为26.75%,无规则卷曲为32.22%。OprF蛋白的三维空间结构为桶状结构。OprF蛋白B细胞优势表位区段：73～88、98～107及302～317。细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位为250～258位的SKVKENSYA及236～331位的PVADNATAE,OprF蛋白的优势Th抗原表位为46～54位的VRNMKNADL,53～59位的YGGSIGY,109～117位的LRPYVSAGL及303～312位的LVNEYGVEG。pET28b-F原核表达载体构建成功，诱导后表达外膜蛋白OprF。结论 系统分析了心力衰竭合并肺部感染铜绿假单胞菌OprF蛋白的理化性质、跨膜结构、信号肽、二级与三级结构等生物学信息，同时成功筛选出特异性抗OprF单克隆抗体。