巨噬细胞PDHA1基因敲除对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝细胞凋亡的影响

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作   者：

王梦;  孙岳;  杨安宁;  宝瑞;  畅思容;  李媛媛;  余梦雪;  刘志宏; 

作者机构：

宁夏医科大学公共卫生与管理学院;  宁夏医科大学基础医学院国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室; 

关键词：

细胞凋亡;  非酒精性脂肪性肝病;  巨噬细胞;  丙酮酸脱氢酶E1 α1亚基; 

期刊名称：

中国病理生理杂志

i s s n：

1000-4718

年卷期：

2023 年 39 卷 001 期

页   码：

123-130

摘   要：

目的:探讨巨噬细胞丙酮酸脱氢酶E1α1亚基(pyruvate dehydrogenase E1 subunit alpha 1,PDHA1)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)中对肝细胞凋亡的作用.方法:随机选取6周龄体重相近的PDHA1基因正常野生型小鼠和巨噬细胞特异性PDHA1基因敲除(PDHA1iΔMΦ/iΔMΦ)小鼠各12只,均分别给予普通饮食和高Hcy饮食喂养12周后用于后续实验.应用琼脂糖凝胶电泳技术对PDHA1iΔMΦ/iΔMΦ小鼠进行基因鉴定;Western blot检测两种基因型小鼠骨髓巨噬细胞PDHA1蛋白表达;使用全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)水平;试剂盒检测肝组织上清液甘油三酯(triglyceride,TG)和ALT水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肝组织结构改变;qRT-PCR和Western blot检测小鼠肝组织中凋亡相关指标Bax和caspase-3的mRNA和蛋白表达.结果:PDHA1iΔMΦ/iΔMΦ小鼠均表达Lyz2-Cre及PDHA1-flox,且巨噬细胞中PDHA1蛋白表达减少(P<0.05),表明巨噬细胞特异性PDHA1敲除小鼠模型构建成功.高Hcy饮食组PDHA1iΔMΦ/iΔMΦ小鼠血清Hcy水平升高(P<0.05),表明高Hcy血症模型构建成功.高Hcy饮食组小鼠肝组织上清液TG和ALT水平显著升高(P<0.05),且巨噬细胞中PDHA1敲除后,血清及肝组织中ALT水平升高更为显著.HE染色结果表明,高Hcy饮食使小鼠肝脏发生脂肪变性,巨噬细胞中PDHA1基因敲除可加重肝细胞的变性坏死.PDHA1iΔMΦ/iΔMΦ组凋亡相关指标Bax和caspase-3表达均显著升高(P<0.05).结论:抑制小鼠巨噬细胞中PDHA1表达,可促进高Hcy饮食诱导的NAFLD小鼠模型中肝细胞的凋亡,这可能是加重NAFLD肝损伤的其中一个机制.