基于柑橘绿霉菌CYP51同源模建的定点突变与抗性机制分析

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作   者：

张建华;  熊丽;  夏诗慧;  王金龙;  李倩;  刘德立; 

作者机构：

华中师范大学生命科学院湖北省整合生物学重点实验室农药与化学生物学教育部重点实验室; 

关键词：

光谱分析;  定点突变;  同源模建;  分子对接; 

期刊名称：

植物保护学报

基金项目：

柑橘青霉菌农药靶标酶CYP51活性部位结构与抑制机理研究
真菌细胞色素P450-14DM基因表达调控与农药抗性机理研究

i s s n：

0577-7518

年卷期：

2012 年 39 卷 01 期

页   码：

81-86

摘   要：

为阐明杀菌剂与PdCYP51的相互作用及其抗性机制,基于最新解析的真核生物人类的CYP51晶体结构,同源模建了PdCYP51的三维结构,并选取商品化的杀菌剂烯唑醇进行分子对接,预测影响PdCYP51与烯唑醇相互作用的关键氨基酸。采用定点突变技术获得了PdCYP51-Y112H、F120L、F120D和S309A 4种突变体(PdCYP51m)。结果表明,突变体蛋白PdCYP51-Y112H、F120L、F120D和S309A表达量均有不同程度的变化,PdCYP51-Y112H和F120L与未突变蛋白表达量相当,而PdCYP51-F120D和S309A表达量增加。4种突变体与杀菌剂的结合能力降低,其结合常数分别为1.28、0.18、1.03和1.31μmol/L,均大于未突变PdCYP51的0.12μmol/L。表明这些氨基酸是杀真菌剂烯唑醇与PdCYP51结合的关键氨基酸,PdCYP51与烯唑醇形成的疏水性空腔和稳定配体杀菌剂分子的作用力是酶蛋白与杀菌剂结合的重要因素。