耐热异淀粉酶的高效表达及其在麦芽糖浆制备中的作用

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作   者：

方安然;  牛丹丹;  乔舰;  吴海洋;  董自星;  路福平; 

作者机构：

天津科技大学化工与材料学院生物化工系;  天津科技大学生物工程学院; 

关键词：

异淀粉酶;  高效表达;  麦芽糖浆生产;  同源结构模拟;  地衣芽胞杆菌; 

期刊名称：

食品与发酵工业

基金项目：

i s s n：

0253-990X

年卷期：

2016 年 42 卷 07 期

页   码：

23-29

摘   要：

淀粉酶法制备高麦芽糖浆工艺中,淀粉液化酶、脱支酶以及β-淀粉酶不可或缺,其中脱支酶是决定淀粉转化为麦芽糖的转化率高低的关键因素。在工业上常用的两种脱支酶中,异淀粉酶比普鲁兰酶能更好地协助β-淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖。首先通过PCR扩增获得异淀粉酶的编码基因iso并克隆入表达载体p HY-WZX,在枯草芽胞杆菌1A717中获得重组质粒p HY-ISO,将构建好的重组质粒电转化入地衣芽孢杆菌D402中,其摇瓶发酵酶活力达330 U/m L,实现了异淀粉酶的异源高效表达。基本酶学特征分析表明:该重组酶适宜反应条件为50~55℃,p H 6.5~9.0;K+、Ca2+、Mg2+对酶活有促进作用,其他离子或化合物强烈抑制酶活。HPLC分析表明,该重组异淀粉酶与普鲁兰酶相比,更有助于极高麦芽糖浆的制备。最后通过在线软件对该酶进行同源结构模拟和分析,进一步确定其为异淀粉酶,为后续对其进行分子改造奠定了基础。