尿酸氧化酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定

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作   者：

朱蕾;  王庆民;  武国栋;  薛彤彤;  孙丽霞;  王晶翼; 

作者机构：

齐鲁制药有限公司药物研究院; 

关键词：

尿酸氧化酶;  高效表达;  纯化;  大肠杆菌; 

期刊名称：

中国生物工程杂志

i s s n：

1671-8135

年卷期：

2011 年 31 卷 04 期

页   码：

83-86

摘   要：

尿酸氧化酶(urate oxidase,Uricase,EC.1.7.3.3)是一种能将尿酸氧化为尿囊素的蛋白酶。合成黄曲霉(Aspergillus flavus)尿酸氧化酶基因,构建表达载体pET43.1a/uox,重组质粒经双酶切鉴定和序列分析,证明插入序列正确,转化到大肠杆菌(Escherichia coli)JM109,菌株经诱导表达尿酸氧化酶蛋白,目的蛋白经过超声破碎,经检测以可溶性蛋白为主;菌体经超声破碎后,上清经过阴离子柱和阳离子柱两步纯化,得到尿酸氧化酶纯品,纯品以分光光度法进行体外酶活性测定。结果显示:尿酸氧化酶在大肠杆菌中获得高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白的50%;表达产物经过两步层析柱纯化,获得电泳扫描纯度为95%的纯品;在体外活性测定中具有分解尿酸的能力,在临床检测和治疗中有重要意义。