两种报告基因在达摩凤蝶细胞克隆株RIRI-PaDe-2-C6中的表达

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作   者：

刘志刚;  丁伟峰;  孙娜;  张欣;  李娴;  谢世聪;  冯颖; 

作者机构：

中国林业科学研究院资源昆虫研究所国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室; 

关键词：

β-半乳糖苷酶;  单细胞克隆;  昆虫细胞系;  达摩凤蝶;  分泌型碱性磷酸酶;  重组杆状病毒; 

期刊名称：

林业科学研究

基金项目：

i s s n：

1001-1498

年卷期：

2018 年 31 卷 04 期

页   码：

31-37

摘   要：

[目的]前期研究中,项目组从达摩凤蝶细胞系RIRI-Pa De-2中分离培养出单细胞克隆株RIRI-Pa De-2-C6,通过感染野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Ac MNPV)发现克隆株RIRI-Pa De-2-C6对病毒敏感性高于原细胞系RIRI-Pa De-2。本研究将对达摩凤蝶单细胞克隆株RIRI-Pa De-2-C6的生物学特性和外源蛋白表达特性进行研究,并与原细胞系RIRI-Pa De-2进行比较,评价其用于外源蛋白表达的可行性。[方法]使用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建重组β-半乳糖苷酶杆状病毒(Ac MNPV-Gal)和重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(Ac MNPV-SEAP),分别侵染RIRI-Pa De-2和RIRI-Pa De-2-C6。在感染后的24、48、72、96、120、144、168 h检测2种重组蛋白的表达量,并对2个细胞系的形态学、生长曲线、倍增时间及核型进行分析和比较。[结果]表明:RIRI-Pa De-2和RIRI-Pa De-2-C6均可表达β-半乳糖苷酶(β-Gal)和分泌型碱性磷酸酶(SEAP),单细胞克隆株RIRI-Pa De-2-C6对重组β-Gal的表达水平显著高于原细胞系RIRI-Pa De-2(P<0.05),在接种Ac MNPV-Gal后96 h表达量达到最高。RIRI-Pa De-2-C6对重组SEAP的表达水平与RIRI-Pa De-2无显著差异(P>0.05)。显微观察发现,RIRI-Pa De-2-C6的细胞类型全部为梭形,比原细胞系RIRI-Pa De-2的细胞组成更加单一。RIRI-Pa De-2-C6的群体倍增时间为94.94 h,比原细胞系RIRI-Pa De-2的倍增时间(67.42 h)长。核型分析显示,RIRI-Pa De-2-C6的染色体数量呈正态分布,数目为21 82条,与RIRIPa De-2的染色体数目分布范围(48 97条)存在显著差异(P<0.05)。[结论]通过单细胞克隆方法获得的克隆株RIRI-Pa De-2-C6无论在外源蛋白表达以及基础生物学特性方面均有别于原细胞系RIRI-Pa De-2。