犬瘟热病毒(CDV) RPA-SYBR Green Ⅰ 检测方法的建立与应用

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关键词：

重组酶聚合酶扩增;  RPA SYBR GreenⅠ;  CDV;  N基因; 

期刊名称：

中国兽医学报

i s s n：

1005-4545

年卷期：

2021 年 005 期

页   码：

905-910

摘   要：

为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒（CDV）的方法,将重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification, RPA）与SYBR GreenⅠ相结合,根据CDV N基因序列中同源性相对较高的保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引物和1条标记dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,优化反应条件和体系,分析其灵敏性及特异性,最后建立一种可以进行临床应用的,特异性检测CDV的RPA-SYBR GreenⅠ方法。结果显示,成功构建检测CDV的RPA-SYBR GreenⅠ方法,此方法的最佳反应条件为实验人员闭合手掌中孵育10 min,引物与探针的最佳比例为2∶1。该方法的最低检测下限为1×101～1×100 TCID50/mL,能够特异地检测出CDV。应用本方法检测临床样品的结果与ELISA、RT-PCR方法的结果一致。结果表明,本试验所建立的CDV RPA-SYBR GreenⅠ检测方法特异性强,灵敏度高,操作简单,可应用于临床。