活性位点附近氨基酸对解淀粉芽孢杆菌核糖核酸酶Barnase酶学性质的影响

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作   者：

李鹏龙;  王雷;  李兴江;  吴学凤;  洪泂;  穆冬冬; 

作者机构：

合肥工业大学食品与生物工程学院;  中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)医保处;  中国科学技术大学生命科学学院; 

关键词：

核糖核酸酶;  稳定性;  催化活性;  定点突变; 

期刊名称：

安徽大学学报(自然科学版)

i s s n：

1000-2162

年卷期：

2024 年 48 卷 005 期

页   码：

71-81

摘   要：

Barnase活性位点附近氨基酸与底物之间的相互作用会影响酶与底物的识别从而影响酶的催化，为了研究活性位点附近氨基酸如何影响催化从而获得更高活性和稳定性的Barnase,采用定点突变技术对解淀粉芽孢杆菌BH072核糖核酸酶Barnase活性位点附近氨基酸进行突变，将突变体酶分别诱导表达、纯化并表征，检测其比酶活和热稳定性.得到最高比酶活的突变酶为N131A,比酶活为41.65 kU·mg-1,相较野生型提高了43.82%.该突变体在60℃放置12 h后仍能保持80%的酶活力.为了探究活性位点附近残基突变对催化反应造成影响的原因，笔者使用同源建模及分子对接分析了催化口袋与底物的相互作用，发现N131A突变提高了酶分子结合底物的能力.该研究所获得的突变体N131A进一步丰富了核糖核酸酶突变体酶库，具有良好应用前景.