环状芽孢杆菌乳糖酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质分析

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作   者：

王元火;  姚斌;  袁铁铮;  操时树;  张伟;  王亚茹;  范云六; 

作者机构：

中国农业科学院生物技术研究所;  中国农业科学院饲料研究所; 

关键词：

酶学性质;  乳糖酶;  基因表达;  环状芽孢杆菌; 

期刊名称：

农业生物技术学报

i s s n：

1006-1304

年卷期：

2003 年 11 卷 01 期

页   码：

85-90

摘   要：

将环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)中的乳糖酶基因在大肠杆菌(Escherichiacoli)中进行了高效表达,并测定了表达的乳糖酶的基本酶学性质。结果表明,表达的乳糖酶有生物学活性,但与来源于环状芽孢杆菌的原始酶相比,其酶促反应的最适pH、最适温度、Km值,以及酶的pH稳定性和温度稳定性等酶学性质均有较大变化。表达的乳糖酶最适pH为5.0,低于原始酶的pH6.5;最适温度为37 ℃,而原始酶为55 ℃;其耐酸性、耐热性及对金属离子的抗性等方面比原酶有所提高;而且表达的乳糖酶Km比原始酶小285倍、Vmax比原始酶大5.4倍,表明经大肠杆菌表达的乳糖酶有较高的底物亲和力,酶促反应效率更高。从乳糖酶的单位表达量来看,原始酶在环状芽孢杆菌的表达量为20.98U/mL,而在大肠杆菌中的表达量提高到33.102U/mL。