两种ACYW135群脑膜炎球菌多糖-CRM197结合疫苗的制备及质量与免疫原性分析

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作   者：

姚永鹏;  张子昌;  李松;  孙俊;  范志源;  许可;  朱慧;  王基宏;  魏鑫;  黄杰; 

作者机构：

成都康华生物制品股份有限公司研发部; 

关键词：

结合疫苗;  脑膜炎奈瑟菌;  质量研究;  白喉毒素无毒突变体197;  免疫原性; 

期刊名称：

微生物学免疫学进展

i s s n：

1005-5673

年卷期：

2024 年 002 期

页   码：

35-42

摘   要：

目的 对比2种结合方式的以白喉毒素无毒突变体197（cross-reacting material 197,CRM197）蛋白为载体制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗的质量与免疫原性。方法 方法一以CRM197蛋白羧基为结合位点，用1-氰基-4-（二甲氨基）吡啶四氟硼酸盐（1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate, CDAP）分别将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基活化为氰基，以己二酸二酰肼（adipic acid dihydrazide, ADH）作为连接剂，最后通过4-（4,6-二甲氧基三嗪-2-基）-4-甲基吗啉盐酸盐[4-（4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl）-4-methyl morpholinium chloride, DMTMM]与CRM197反应得到单价结合物；方法二用CRM197蛋白氨基为结合位点，用高碘酸钠分别氧化A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基为醛基，加入CRM197蛋白生成席夫碱，最后通过氰基硼氢化纳还原，得到单价结合物。对2种结合方式制备的结合物原液进行理化检测，合格后再分别将2种路线的单价结合物按比例与冻干辅料混合后经冻干制成2种ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗（ACYW135-CRM197）,分别免疫NIH小鼠后，用ELISA检测小鼠血清中抗体并进行统计学分析。结果 2种结合方式制备的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗，游离多糖含量均＜20.00%,KD值在0.2以前的洗脱液多糖回收率均＞80.00%,但以CRM197蛋白羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌单价结合物原液中游离多糖含量（3.20%～11.50%）均低于以氨基为结合位点的相应结合物原液中的游离多糖（8.35%～17.42%）;疫苗成品的平均相对分子质量，以CRM197蛋白羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗更大。2种结合疫苗免疫小鼠后其体内产生的抗体经检定后统计分析，A群、C群多糖免疫原性差异均无统计学意义（P=0.080,P=0.176）,W群、Y群多糖免疫原性差异均有统计学意义（P=0.015,P=0.027）。结论 以CRM197蛋白载体羧基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗在质量和免疫原性方面均不差于传统的以CRM197蛋白载体氨基为结合位点的ACYW135群脑膜炎球菌结合疫苗。