免疫亲和层析柱纯化大豆球蛋白多克隆抗体的研究

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作   者：

姚利利;  席俊;  陈慧彬;  陈阳;  皮江一;  李潘; 

作者机构：

河南工业大学粮油食品学院; 

关键词：

多抗血清;  亲和层析;  纯化; 

期刊名称：

中国食品学报

基金项目：

加工导致β-伴大豆球蛋白致敏性降低的亚分子结构定位

i s s n：

1009-7848

年卷期：

2021 年 006 期

页   码：

296-300

摘   要：

为了得到纯度高、特异性好的抗大豆球蛋白多克隆抗体,用溴化氢活化的琼脂糖4B纯化经硫酸铵分级沉淀后的抗体,此免疫亲和层析过程节省时间且操作简单。经凝胶过滤层析的大豆球蛋白,溶胀后的填料与大豆球蛋白配基以共价键的形式连接,利用抗原抗体特异性结合的特点,杂蛋白随流动相流出,再利用洗脱液将抗大豆球蛋白的目标抗体特异性地洗脱下来,用紫外检测仪检测非特异性洗脱峰和特异性洗脱峰。通过SDS-PAGE鉴定,多抗血清中的其它蛋白组分被非特异性洗脱掉,经浓度测定,特异性洗脱的蛋白质量浓度为0.3 mg/mL,间接ELISA显示,纯化后血清稀释128倍后显示为阳性。间接竞争ELISA测定抗体特异性结果显示抗体特异性得到提高。抗体被成功纯化,为加工破坏大豆球蛋白致敏性亚分子结构定位奠定基础,从而促进低致敏性食品的研发。