维吉尼亚链霉菌P450-105D1在大肠杆菌中自诱导表达和雄烯二酮的羟化活性

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作   者：

张雁;  韩毛振;  罗学才;  王晶晶;  周明辉;  陈亚军; 

作者机构：

华中科技大学 生命科学与技术学院;  合肥停弦渡科技有限公司;  合肥师范学院 生命科学学院; 

关键词：

9-羟基雄烯二酮;  细胞色素P450-105D1;  自诱导表达;  微生物转化; 

期刊名称：

生物学杂志

基金项目：

高甘露糖型N-糖基化修饰对灰盖鬼伞菌漆酶Lcc9酶学性质的影响

i s s n：

2095-1736

年卷期：

2019 年 36 卷 05 期

页   码：

46-51

摘   要：

雄烯二酮是甾体药物生产的重要中间体,其C9位羟基化产物9-羟基雄烯二酮也是多种重要甾体药物的合成前体,具有重要的临床药用价值。微生物转化生产9-羟基雄烯二酮具有重要的经济价值。将维吉尼亚链霉菌IBL14中svu005与pET28a质粒融合,导入大肠杆菌BL21(DE3)。使用优化的自诱导培养基诱导表达其产物细胞色素P450-105D1(CYP105D1)蛋白,以雄烯二酮等多种甾体作为底物进行微生物羟化。结果显示,构建的重组质粒pET28a-svu005在大肠杆菌中成功表达,使用ZYM培养基,自诱导表达的活性蛋白产量(0.0916 nmol/L)显著高于传统的IPTG诱导方式的产量(0.0367 nmol/L)。表达产物CYP105D1可以羟化雄烯二酮,经HPLC检测,产物为9-羟基雄烯二酮。发现了微生物转化合成9-羟基雄烯二酮的新途径,具有很好的工业应用前景。