匍枝根霉组成型内切葡聚糖酶基因的筛选和表达

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作   者：

董玉稳;  汤斌;  李松;  张莹莹;  李祥林; 

作者机构：

安徽工程大学生物与化学工程学院; 

关键词：

匍枝根霉;  异源表达;  组成型;  内切葡聚糖苷酶; 

期刊名称：

生物学杂志

基金项目：

植物免疫受体蛋白RPM1信号起始机制的研究

i s s n：

2095-1736

年卷期：

2014 年 05 期

页   码：

19-22+40

摘   要：

从匍枝根霉cDNA文库中筛选得到组成型内切葡聚糖酶基因(zeg1和zeg2),经比对zeg1和zeg2相似度为86%,有相似的催化活性区域,经CDD(保守序列数据库)分析,该蛋白归属于糖苷水解酶第5家族,对比PDB(蛋白结构数据库)中第五家族的关键催化残基,预测该两个蛋白的第147位的谷氨酸(E)及199位的色氨酸(W)为该蛋白的关键催化残基。重组zeg1发酵至20 h时达到最高酶活为0.422 IU/mL;重组zeg2发酵至24 h达到最高酶活为0.509 IU/mL。酶学性质研究表明重组zeg1和zeg2的最适温度均为50℃,最适pH值均为5.0。通过CMC-SDSPAGE电泳,复性后染色,测得重组zeg1和zeg2的分子量分别约为55 kD和58 kD。