柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻小鼠肾纤维化的作用及其机制

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作   者：

谢柯欢;  张浩军;  谭睿陟;  粟宏伟;  刘鹏;  李平;  王丽; 

作者机构：

北京顺义区中医医院肾病科;  西南医科大学附属中医医院中西结合研究中心;  西南医科大学附属中医医院泌尿外科;  中日友好医院临床研究所; 

关键词：

Wnt/β-catenin信号通路;  柴黄益肾颗粒;  肾纤维化; 

期刊名称：

解放军医学杂志

i s s n：

0577-7402

年卷期：

2024 年 007 期

页   码：

804-813

摘   要：

目的 探讨柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的作用及其机制。方法 将24只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组及柴黄益肾颗粒低、高剂量组(n=6)。对照组仅暴露且游离右侧肾输尿管；模型组行UUO建立UUO动物模型；柴黄益肾颗粒低、高剂量组按模型组方法建立UUO小鼠模型并分别予以3.8、7.6 g/kg柴黄益肾颗粒灌胃，7 d后麻醉处死小鼠收集肾标本。采用HE、Masson染色观察肾脏病理变化及纤维化程度，天狼星红染色观察胶原沉积情况。采用Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、 β-连环蛋白(β-catenin)相关蛋白的表达水平。采用RT-PCR检测A33及GSK-3β、β-catenin mRNA水平的变化。同时，以正常小鼠肾小管上皮细胞(TCMK1)作为正常组，并利用转化生长因子-β(TGF-β)刺激TCMK1建立体外纤维化模型，柴黄益肾颗粒含药血清处理建立体外用药模型；并通过转染A33过表达质粒在TCMK1细胞内过表达A33，观察纤维化相关指标及A33及GSK-3β、β-catenin mRNA的表达变化。结果 RT-PCR检测结果显示，与对照组比较，模型组A33水平明显升高，而柴黄益肾颗粒高、低剂量组明显降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，模型组α-SMA、FN、Col-Ⅰ等纤维化相关因子的表达水平明显高于对照组(P<0.05)；与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组α-SMA、FN、Col-Ⅰ的表达水平明显降低(P<0.05)。HE、Masson、免疫组化染色结果显示，与对照组比较，模型组肾脏结构损伤严重，胶原沉积明显增加，且GSK-3β、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)；与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组肾脏结构良好，肾脏损伤及纤维化均明显好转，GSK-3β、β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。体外实验结果证实，与正常组比较，A33过表达可促进TCMK1细胞纤维化相关因子的上调，明显增加Wnt/β-catenin信号通路下游靶点GSK-3β和β-catenin mRNA的表达(P<0.05)，且A33过表达可逆转柴黄益肾颗粒含药血清下调的细胞纤维化改变(P<0.01)。结论 柴黄益肾颗粒可通过下调A33/Wnt/β-catenin信号通路明显减缓UUO小鼠肾纤维化，且A33可能是肾纤维化的一个潜在治疗靶标。