天蚕素AD在毕赤酵母中的多拷贝整合表达及表达条件优化

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作   者：

牛军波;  薛林贵;  吴娟丽;  陈熙明;  李娟;  王霞;  刘阳;  Emaneghemi Brown; 

作者机构：

中国科学院大学;  中国科学院西北生态环境资源研究院甘肃省极端环境微生物资源与工程重点实验室;  西北师范大学;  兰州交通大学化学与生物工程学院; 

关键词：

天蚕素AD;  基因工程菌;  生物效价; 

期刊名称：

微生物学通报

基金项目：

祁连山硫铁矿尾矿微生物多样性变化及其生态修复试验研究

i s s n：

0253-2654

年卷期：

2020 年 05 期

页   码：

1441-1451

摘   要：

【背景】天蚕素抗菌肽是目前研究最清楚、效果最显著的抗菌肽,实现工业化生产为其在农业、养殖业中的应用奠定了基础。【目的】获得一株高效生产天蚕素AD的基因工程菌株。【方法】构建重组载体pGAPZαA-CAD通过电击转化至PichiapastorisX33中,表达天蚕素AD基因并获得X33/GCAD菌株;构建重组载体pUCGAP-CAD导入至X33/GCAD菌株中。pGAPZαA-CAD是以博来霉素为抗性筛选标签被整合到P. pastoris X33的GAPDH启动子区域,pUCGAP-CAD是以遗传霉素为抗性筛选标签被整合到P. pastoris X33的非翻译rDNA区域,最终获得一株高效表达天蚕素AD的酵母菌株X33/GUCAD。【结果】通过质谱分析鉴定X33/GUCAD表达的抑菌物质为天蚕素AD,通过发酵条件的优化,表明X33/GUCAD菌株在以甘油为碳源和以蛋白胨、酵母提取物为有机氮源的情况下具有较强表达天蚕素AD的能力。【结论】较高的拷贝数更有利于提高天蚕素AD的产量,此工程菌株在后期发酵过程中稳定性较好,适于工业化生产。